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Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號轉導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產品。我們專注于生產純化蛋白質和易于使用的試劑盒，以研究生物化學和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我們現有的產品，我們還在產品線中為微管，微管蛋白，運動蛋白，小G蛋白效應物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務。
· 概述
· 關于
· CITATIONS
· 常見問題解答
測定所有肌動蛋白結合蛋白（ABP）以確保其活性與公布的值相當。測定因產品而異，包括F-肌動蛋白切斷測定，F-肌動蛋白激活的ATP水解和肌動蛋白聚合測定。顯示了測量WASP VCA結構域蛋白在肌動蛋白聚合中的作用（右）。
Cytoskeleton，Inc。銷售一系列純化的肌動蛋白結合蛋白。所有Cytoskeleton的肌動蛋白結合蛋白都具有高純度，并經過嚴格的生物活性測試。細胞骨架還為肌動蛋白結合蛋白研究提供肌動蛋白，抗體和試劑盒。 |
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由Arp2 / 3和WASP VCA結構域刺激的肌動蛋白聚合。試劑盒BK003用于研究Arp2 / 3（Cat。＃RP01）和WASP VCA（Cat。＃VCG03）結構域對肌動蛋白聚合的影響。 |
問題1：哪種肌動蛋白結合蛋白（ABP）可用作F-肌動蛋白結合對照？
答案1：肌動蛋白結合蛋白α-輔肌動蛋白（Cat。＃AT01）是一種F-肌動蛋白結合和交聯蛋白，使其可用作F-肌動蛋白結合研究的對照。它的Kd是1μM，這意味著在該濃度下發生50％結合。因此，我們的目標是使用 2μM的α-肌動蛋白作為結合測定中的陽性對照。在結合反應中，2μM濃度的α-輔肌動蛋白相當于0.23μg/μl。此外，α-輔肌動蛋白對pH敏感，其高親和力發生在pH 7.0。
問題2：Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動蛋白活力？
答案2：遺憾的是，我們不會出售運動級肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動蛋白運動試驗。我們發現質量控制測試非常難以復制，因此我們無法充分確保試劑的質量。因此，肌球蛋白（Cat。＃MY02和MY03）和重型meromyosin蛋白（Cat。＃MH01）不推薦用于F-肌動蛋白運動測定。已經測試過這些試劑的客戶在運動方面沒有取得很好的成功，因此我們不建議購買樣品進行測試。如果需要運動級肌動蛋白或重型meromyosin，我們建議遵循原始方案（Kron和Spudich，1985）并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩定性。
參考文獻： SJ Kron和JA Spudich，1985年。熒光肌動蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動。PNAS，83,6272-6276。
窗體頂端
2x50 ug (Cat. # RP01P-A)
6x50 ug (Cat. # RP01P-B
窗體底端
產品用途包括
· 體外肌動蛋白聚合刺激化合物的陽性對照
· 發現Arp2 / 3激活或抑制化合物
· Arp2 / 3相互作用蛋白的表征和發現
材料
Arp2 / 3蛋白質復合物由7個蛋白質亞基組成，均以大致相等的化學計量比存在（見圖1）。Arp2 / 3復合物是肌動蛋白絲成核的關鍵調節因子，蛋白質亞基在進化上是高度保守的。蛋白質復合物已從豬腦中純化，并以凍干粉末形式提供。當用蒸餾水重構，所述復合物是在以下緩沖液為：20mM Tris pH值7.5，25mM的氯hua鉀，1毫摩爾MgCl 2，0.5mM的EDTA，0.1mM的ATP，1％葡聚糖和5％的蔗糖。Arp2 / 3復合物的分子量為224kDa。
注意： 來自procine大腦的RP01P取代牛腦中的RP01。我們比較了兩種來源的Arp2 / 3復合物的活性，并發現它們在肌動蛋白聚合試驗中表現相同（見圖2）
純度
通過在4-20％聚丙烯酰胺凝膠上掃描考馬斯藍染色蛋白的光密度測定法測定純度。確定Arp2 / 3蛋白質復合物純度為90％（參見圖1）。
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| 圖1.Arp2 / 3蛋白純度測定： 在4-20％SDS-PAGE系統中通過電泳分離10μg的Arp2 / 3復合物樣品，并用考馬斯藍染色。用Precision RedTM Protein Assay Reagent（Cat。＃ADV02）測定蛋白質定量。Mark12分子量標記來自Life Technologies。 |
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在肌動蛋白聚合測定（Cat。＃BK003）中測試生物活性 RP01P 。結合WASP（Cat。＃VCG03）的VCA結構域，一種Arp2 / 3激活劑，與沒有RP01的對照相比，它顯示刺激肌動蛋白聚合20倍。這表明對肌動蛋白聚合誘導的Arp 2/3特異性（圖2）。
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| 圖2.使用Arp2 / 3和VCA結構域蛋白的 肌動蛋白聚合測定：如該方法中所述進行肌動蛋白聚合; 所有反應均含有0.8μM肌動蛋白。含有Arp2 / 3或VCA的反應（數據未顯示）顯示肌動蛋白成核很少或沒有增強。單獨的肌動蛋白在這些條件下（單獨的肌動蛋白反應）也顯示出低聚合能力。然而，在存在VCA結構域的情況下，Arp2 / 3導致肌動蛋白成核的增強（注意聚合的陡峭成核階段）。隨時間以任意熒光單位測量肌動蛋白聚合。在我們的測試中，豬衍生的Arp2 / 3（孔E＆F）表現出與源自牛源（孔G＆H）的Arp2 / 3相同的表現。 |
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問題1：存儲Arp2 / 3（Cat。＃RP01P）的*方法是什么？
答案1： 將干燥的凍干的Arp2 / 3蛋白質（<10％濕度）保存在4°C，穩定6個月。凍干蛋白也可以在-70°C下干燥儲存，在那里它可以穩定6個月。但是，在-70°C時，管蓋上的橡膠密封可能會破裂并產生水分。因此，我們建議在4°C下儲存。如果儲存在-70°C，如果使用這種儲存條件，則必須在干燥劑中加入凍干蛋白。用10μl冷的Milli-Q水將蛋白質復合物重懸至5mg / ml。重懸后，復合物在以下緩沖液中：20 mM Tris pH 7.5,25 mM KCl，1 mM MgCl 2，0.5mM EDTA，0.1mM ATP，1.0％（v / v）葡聚糖和5％（v / v）蔗糖。然后將蛋白質等分成實驗大小的量，在液氮中快速冷凍并在-70℃下儲存，在此穩定6個月。Arp2 / 3的進一步稀釋應在以下緩沖液中進行：20mM Tris pH 7.5,25mM KCl，1mM MgCl 2和1mM DTT（注意：在使用前立即將DTT加入緩沖液中）。注意：將液體氮中的Arp2 / 3蛋白快速冷凍非常重要，因為其他冷凍方法會導致活性顯著降低。通過置于室溫水浴中1分鐘快速除霜。避免反復凍/融循環。
問題2：Arp2 / 3（Cat。＃RP01P）是否與肌動蛋白聚合試劑盒（Cat。＃BK003）兼容？
答案2： 是的，Arp2 / 3與肌動蛋白聚合試劑盒（Cat。＃BK003）配合使用可以很好地研究肌動蛋白結合蛋白對肌動蛋白聚合的影響。有關其他信息，請參閱Arp2 / 3數據表（Cat。＃RP01P）。Arp2 / 3復合物能夠在體外以1：200的摩爾比（Arp2 / 3：肌動蛋白）誘導肌動蛋白絲的支化聚合。這種刺激在體外可觀察到聚合試驗; 然而，在典型的聚合條件下，單獨的Arp2 / 3的刺激非常低。在存在N-WASP蛋白（或N-WASP的VCA結構域，Cat。＃VCG03）的情況下，Arp2 / 3的成核活性大大增強。在Arp2 / 3數據表中描述的聚合測定中，芘肌動蛋白（Cat。＃AP05或BK003）的終濃度為0.8μM，Arp2 / 3復合物為10 nM，VCA結構域（Cat。＃VCG03） ）是400 nM。
注意： 來自procine大腦的RP01P取代牛腦中的RP01。我們比較了兩種來源的Arp2 / 3復合物的活性，并發現它們在肌動蛋白聚合試驗中表現相同。以下測定參考Arp2 / 3蛋白復合物：牛腦（Cat.RP01）。
Leng，Y.，Zhang，J.，Badour，K.，Arpaia，E.，Freeman，S.，Cheung，P.，Siu，M。和Siminovitch，K。（2005）。Abelson-interactctor-1促進WAVE2活化所需的WAVE2膜易位和Abelson介導的酪氨酸磷酸化。PROC。國家科。科學院?？茖W。美國102,1098-1103。
van der Gucht，J.，Paluch，E.，Plastino，J。和Sykes，C。（2005）。應力釋放驅動基于肌動蛋白的運動的對稱性破壞。PROC。國家科?？茖W院?？茖W。美國102,7847-7852。
貨號 | 品名 | 規格 | 品牌 |
BK165-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK165 | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK163-S | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK163 | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK160-S | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK160 | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK162-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK162 | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK161-S | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK161 | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
AAC04-Beads | Acetyl-Lysine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
APY03-Beads | Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM11-Beads | SUMOylation 1 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM24-Beads | SUMOylation 2/3 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
UBA01-Beads | Ubiquitination Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
CIG02-Beads | Acetyl-Lysine Control Beads | ea | cytoskeleton |
CIG03-Beads | SUMO1 IP Control Beads | ea | cytoskeleton |
CIG01-Beads | IgG Control Beads | ea | cytoskeleton |
CUB02-Beads | Ubiquitination Control Beads | ea | cytoskeleton |
BLR01 | BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit | ea | cytoskeleton |
BLR02 | BlastR™ Rapid Filtration Kit | ea | cytoskeleton |
AAC02 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1) | ea | cytoskeleton |
AAC03 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC03-HRP | Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC01 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20) | ea | cytoskeleton |
APY03 | Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
APY03-HRP | Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
ASM01 | SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16) | ea | cytoskeleton |
ASM24 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2) | ea | cytoskeleton |
ASM23 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
ASM23-HRP | SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
AUB01 | Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
AUB01-HRP | Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
PHDG1 | Acti-stain 488 phalloidin | ea | cytoskeleton |
PHDH1 | Acti-stain 555 phalloidin | ea | cytoskeleton |
PHDN1 | Acti-stain 670 phalloidin | ea | cytoskeleton |
BK001 | Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
BK003 | Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
AKL95 | Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AD99 | Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
AS99 | Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle | ea | cytoskeleton |
AKL99 | Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AKF99 | Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AP05 | Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
APHR | Actin protein (rhodamine): human platelet | ea | cytoskeleton |
AR05 | Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AT01 | Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
RP01P | Arp2/3 protein complex: porcine brain | ea | cytoskeleton |
CS-TFC01 | Cardiac Thin Filament Complex (CTFC) | ea | cytoskeleton |
CF01 | Cofilin 1 protein: human recombinant | ea | cytoskeleton |
HPG6 | Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant | ea | cytoskeleton |
MH01 | Heavy meromyosin protein | ea | cytoskeleton |
CS-MH03 | Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment) | ea | cytoskeleton |
CS-MYS03 | Myosin - cardiac S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS04 | Myosin - skeletal muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS05 | Myosin - smooth muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
MY02 | Myosin II protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
MY03 | Myosin protein: bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
PR02 | Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant | ea | cytoskeleton |
PHDR1 | Rhodamine Phalloidin | ea | cytoskeleton |
CY-SC001 | SiR-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
CY-SC013 | SiR700-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
VCG03 | WASP protein VCA domain: GST tagged: human | ea | cytoskeleton |
上海起發實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務商
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